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Jun 15, 2021 · 除了提交序列数据量大的问题之外，还有一个选项要注意，blastn是提交核酸序列比核酸数据库，如果你选择了tblastx就会把你提交的序列按照6种不同的阅读框翻译成蛋白质，然后把核酸数据库中的序列也6框翻译，然后按蛋白质比对的blastp比对，然后给出结果。
特别是，当你用NCBI的参考序列作为模板和参考序列数据库作为标准来设计引物时，Primer-BLAST可以设计出只扩增某一特定剪接变异体基因的特异引物。 最后建议用oligo6或primer5验证引物自身的特性：发夹结构、引物自身二聚体、错配和引物间二聚体， G的绝对值。
很多刚接触生物学研究的小伙伴经常会问： 应该如何使用ncbi查询目的基因序列、 怎样进行引物的设计、 如何使用blast进行序列比对？ 等等 针对这些问题，小编收集整理了一系列教程，为科研工作者提供一份相对专业和简明的资料，以作基础参考之用！
NCBI--Primer Blast 比对步骤: 1.打开NCBI，进入Blast，网页如下： 点击上图红框标记的Primer-Blast ，进入如下界面，在界面引物序列处，将正反向引物序列粘贴进去，5’-3 ’ 方向。
Jan 5, 2019 · 从NCBI的primer blast里设计出的引物往往有很多对，但并不是每一对都有效，选择有效的引物有一些原则。
从三月中旬开始，登陆NCBI，进行Blast序列比对总是刷不开网页，有没有解决办法
从文献中查到一个引物序列，然后用NCBI，blast验证引物，但结果不会看，还请教各位会的指导一下，非常感谢！
May 23, 2023 · blast啥没blast出来？目前完全没有相似片段可能性很低了，已知物种基本上都可以找到同源的。我觉得大概率是你blast不咋会用，或者物种跑错了，比如跑出来的是污染的微生物的。 如果真的blast不出来，新基因不就出来了嘛这不快乐高分文章送上门？
Dec 11, 2018 · 首先打开NCBI，选择“Nucleotide”，并在搜索框输入基因名。 一般用目标基因的突变体1去设计引物，也就是要选择目标基因的“transcript variant 1, mRNA ”,没有1就用2、3，以此类推。
AATGTCCACAGTCACTCGCCACT 当在NCBI输入前导引物时显示“Please correct the following errors: Specified left primer exceeds built-in maximum of 36. 请教一下，我该如何验证这对引物的特异性呢？谢谢大家 引物来自文献 Forensic Science International 82 (1996) 227-232
