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我现在构建了pcambia1305的植物表达载体，双酶切载体和我的目的片段后连接，菌液PCR无条带，然后随机送测了两个菌液结果小时目的条带和载体已经连上了，可是为什么菌液PCR没有条带呢。载体引物和目的片段的引物都试过了。都没条带。
5.RS-PCR法（RNA-specific PCR） 也称为链特异性PCR,主要指用于RNA模板的特异性PCR法，该法可明显降低假阳性而不影响PCR的敏感性。 其关键在于设计引物，逆转录引物的3ˊ端(A区)有2 0个核苷酸左右为模板的特异性互不序列，5ˊ端2 0个核苷酸(C区)为附加修饰碱基。
十分着急，最近做甲基化pcr，在空白组也就是不加模板组也有我的目的条带，怀疑试剂污染，但用的酶和水都是新买的，引物也是新配的，移液器高压灭菌过的现在怀疑实验室气溶胶，但不知如何去除，我在网上查了一下，说用1n盐酸擦拭试验台，开紫外（但据说只对大片段可以消除）；我已按网上去污染方法做了5天，目前还是空白有条带。
Jun 25, 2021 · 求助PCR内参GAPDH和ACTIN的CT值过高. 这个帖子发布于 3 年零 141 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。. 跑PCR内参用GAPDH，CT值都在30以上，基本上是34-35左右；又用ACTIN跑，CT值在27-33左右。. 目的基因每次都小于30，四个组基本上稳定在29，23，28，24。. 测RNA ...
丁香园论坛 核酸基因技术 PCR/RACE/RNA-Seq 帖子详情. 【求助】关于二次PCR的问题. 浏览 949 ·讨论 4. wang_yun_1983 楼主. 发布于 2008-07-24IP. 只看楼主. 这个帖子发布于 16 年零 115 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。. 想请教一下大家，如果我做二次PCR，是将第 ...
丁香评论员. 原理: 敲低是通过shRNA降解mRNA，降低了蛋白翻译前的mRNA模板量，导致 down protein express。. 因此，只要你蛋白量表达低了，必定是mRNA降低造成的。. 根据这个原理分析结果: 只要你认为你的WB没有问题，那么一定是你qPCR的问题. 建议: 1.WB 做重复，NC组转 ...
（图2 RT-PCR扩增目的片段步骤简易示意图） 3 引物（primer） 3.1 什么是引物. PCR引物（primer）是短的单链DNA片段，被设计成与将要扩增的目标序列的开始和结束互补。在聚合酶链反应中引物决定了被复制的DNA序列。
荧光定量PCR 仪加热模块分0.2ml跟0.1ml两种，如果0.1ml加热模块用成0.2ml耗材，则会造成耗材压扁，甚至造成机器故障；如果0.2ml加热模块用成0.1ml耗材，则会造成反应管的外壁和荧光定量PCR仪器的温控模块没有充分接触，从而出现热传导不充分，进而影响酶的活性，会引起重复性不好，或者溶解曲线多峰（非特异扩增），甚至是假阴性结果；
用相同引物对pcr产物再次扩增 存在以下几个问题： 1. pcr产物并不是很稳定，存在端点的降解，如果放时间长了可能导致引物不能结合到模板上，导致扩增失败，这也是巢式pcr第一轮产物较第二轮产物长的原因； 2. 经过第一轮pcr后，模板呈指数扩增，把第一轮pcr ...
不建议使用PCR产物直接酶切，因为产物中的Taq Buffer会影响到酶切体系中的离子浓度，从而影响酶切效率。 纯化过程建议使用胶回收试剂盒，Takara的效果就不错，回收效率达到90%以上应该没问题的。
